Genómica de Célula Única


Publicada em
Análisis Físico-químicos
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Segunda, Dezembro 18, 2017
Separação de Células Únicas em High Throughput

Historicamente, a Citometria de Fluxo implicou a análise de fenótipo celular, a nível de população, mais do que a nível unicelular. Sendo assim, a análise genética de populações separadas por sorting utiliza os valores médios de populações heterogéneas. 

Devido à heterogeneidade  celular, inclusive entre células aparentemente idênticas e à necessidade de determinar marcadores moleculares, há uma importância crescente no desenvolvimento de métodos para o estudo de células a nível unicelular. A recente análise de ARN (ARB-seg) a nível unicelular está oferecendo informação fundamental para discernir e perfilar a variabilidade de célula única a nível genómico.

Para poder realizar estes estudos a grande escala e com valor estatístico, é necessário realizar estas análises a nível high throughput. A metodologia de sorting, é um dos melhores métodos devido à grande quantidade de células que se podem separar a alta velocidade, com base em diferentes marcadores biológicos. 

Até à data, o handicap da técnica de sorting foi a necessidade de técnicos especializados e com muita experiência para realizar os ajustes óticos e de fluídica dos equipamentos.

Para evitar perdas durante o processo de purificação de ARN, devem ser usados volumes mínimos. Por este motivo, é fundamental a precisão da posição de sorting em cada poço da placa.

O Sorter SH800 de Sony possui várias caraterísticas que o tornam perfeito para esta aplicação. É um sistema completamente automático, usa chips de microfluídica, com diversos tamanhos de nozzle, para a utilização de células de diversos tamanhos. Todos os componentes de fluídica são permutáveis pelo utilizador, para controlar a presença de nucleases, tais como RNase e assegurando a integridade da amostra.

Citometria_izasascientific

Angled Sorting Plate

Para maximizar a probabilidade de que a célula caia sobre o buffer de lisis; além do adaptador para placas standard de 96 ou 384 poços, o equipamento dispõe de um adaptador com um ângulo de inclinação de 4 graus.

 

 

Movimento da placa

O tempo necessário para separar em placas de 384 poços não está determinado pela velocidade de sorting, mas sim pelo movimento da placa e pela comunicação desta com o Software. Sony desenvolveu uma alta precisão e velocidade de controlo de placa neste equipamento.

Calibração de alta precisão

O equipamento realiza uma calibração automática da posição da placa.

Index Sorting

O software de Sorting Index, regista as coordenadas X e Y de cada célula ou evento separado em placas multipoço. Este parâmetro permite o seguimento da dispersão de luz e de intensidade de fluorescência de cada célula individual separada em cada poço.

Além disso, os dados de fenótipo de cada célula individual separada podem indexar-se através do software, de modo que estes dados podem ser integrados com ensaios de expressão génica.


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